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技術問答(FAQs) - 特殊品系技術問答(FAQs) - 特殊品系
裸鼠 疾病模型 SHR 疾病模型 Dahl/SS 疾病模型 ZDF 裸鼠 Q1 BALB/c Nude, CD-1 Nude, 和NU/NU三者有什么區別？ 1. 屬于三個不同的品系： （1）BALB/c Nude來源于BALB/c小鼠基因突變； （2）NU/NU裸鼠最初由NIH培育成功，是一個獨立的封閉群品系； （3）CD-1 Nude，將nu基因導入CD-1小鼠獲得該品系。 2. 遺傳學控制不同： （1）BALB/c Nude為近交系，兄妹交配方式進行繁殖，后代基因純合程度高，個體間差異��； （2）NU/NU、CD-1 Nude為封閉群，隨機交配方式進行繁殖，后代基因純合程度低，個體間差異大。 3. 生理學性狀的相同點： 繁育方式均采用♂nu/nu×♀nu/+，后代個體均有純合體 “nu/nu”（無毛）和雜合體“nu/+”（有毛）之分，比例接近1:1 。 4. 免疫缺陷角度：三者相同 都沒有胸腺，不能產生T淋巴細胞；但是B淋巴細胞和NK細胞功能正常。 5. 使用角度 BALB/c Nude、NU/NU、CD-1 Nude均可用于腫瘤學研究和腫瘤移植（不排除三種裸鼠對某些特定瘤株的差異）。
Q2 我購買的裸鼠養了一段時間后，發現體表有大量皮屑，請問是什么原因？ 出現這個現象一般有兩個方面的原因： 1)彌漫性皮炎：細菌、真菌感染、營養因素缺乏引起的皮膚角質化現象。這種彌漫性皮炎癥狀一般為散發出現，同一個籠盒內動物個體之間不具備傳染性。此時，牛棒狀桿菌檢測為陰性。 2)第二個原因是裸鼠感染了牛棒狀桿菌(Corynebacterium bovis)，導致皮膚“鱗屑”現象。此時，如果將裸鼠送檢，可以檢測到牛棒狀桿菌為陽性： a)革蘭氏陽性桿菌 b)是一種最常見的大棒狀桿菌(Large Corynebacterium) c)免疫功能正常的大小鼠一般不會感染 d)對無毛鼠和免疫缺陷鼠致病，一旦感染，幾乎是終身攜帶 e)組織學檢查可見彌漫性棘層肥厚 f)臨床癥狀：感染后7-10天出現“鱗屑”癥狀，該癥狀會在14-20天后消失 g)對動物影響：體重減輕、攝水量增加、移植物生長緩慢、對化療敏感性增加 h)去除：感染后很難消除。需要環境徹底消毒，動物重新引種或凈化
Q3 感染了棒狀桿菌的裸小鼠會傳染嗎？ 會傳染。牛棒狀桿菌會存在于感染小鼠的皮屑中，可以通過空氣和接觸傳播，能夠引起同一籠和同一個房間其他個體的感染。
Q4 荷瘤裸小鼠感染了棒狀桿菌，腫瘤還能用于傳代保種嗎？ 不建議繼續傳代保種。 （1）牛棒狀桿菌主要感染和作用部位為皮膚，同時從被感染動物的糞便、口咽部或被污染的環境中都可以分離到病菌。其對動物的影響主要為因皮膚損傷、厭食、瘙癢引起的脫水及體重 丟失，對免疫系統的影響未知。 （2）有美國專家提到過牛棒狀桿菌可能會污染腫瘤組織，并隨其傳代而感染其他動物。也許歸因于下面的原因： a) 取材時的污染：荷瘤鼠感染了牛棒狀桿菌，一方面機體自身在較長的一段時間內會攜帶該菌，同時由于牛棒狀桿菌存在于皮屑中，可以傳播到（或附著在）房間內任何一個地方，籠架 具、地面、墻壁、天花板、門手，甚至操作人員的手套、用于腫瘤組織取材的工作臺、手術器械，因此取材時如果稍不注意，就會被污染，污染后的腫瘤組織自然會導致后一批被接種個體的 感染。 b) 環境對動物的污染：由于牛棒狀桿菌是一種很難、很難根除的細菌，接種了干凈腫瘤組織的小鼠如果飼養在沒有徹底根除牛棒狀桿菌的環境中，也會出現陽性感染。
Q5 對于牛棒狀桿菌感染，有哪些可行性預防措施？ (1) 硬件設施：大小鼠應飼養在SPF級動物設施中，具體硬件指標應符合GB 14925的要求。 (2) 儀器設備、實驗器材：籠盒、籠架等采取高溫（≥80℃）和/或高壓滅菌的方式進行消毒，不適合高壓的儀器設備、實驗器材使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）或 同等效力消毒劑進行表面擦拭。 (3) 物料：采用輻照或高壓滅菌的飼料、墊料、水，定期進行無菌檢測；其余物料進行高壓或其他滅菌方式處理，保證滅菌效果。 (4) 人員：固定人員（飼養員、實驗員）進行同一房間的動物處理，不交叉處理其他房間內動物。若實驗人員同時進行不同實驗項目，則應保證先操作裸鼠品系，再操作其他品系。 (5) 日常清潔消毒：不只局限于動物房的飼養間，其它包括實驗間、走廊、更衣室、緩沖間等，都應使用含有效氯400～700 mg/L的消毒液（或1:18:1 CLIDOX）進行地面、墻面、天花板、 桌面、房門、籠架、籠具及其他設備外表面等的消毒。 (6) 籠盒操作：盡可能減少籠盒操作，若同一房間內放置了多個批次、多種品系的動物，建議先操作新到的裸鼠品系，再操作其他品系。如果一個飼養間內既有裸鼠，也有免疫程度更為嚴 重的有毛SCID鼠，建議先操作裸鼠，再操作SCID鼠（因為現有資料證明牛棒只感染無毛鼠，這或許與無毛鼠缺少毛發這層物理屏障有關）。 a) 飼養/實驗人員應穿著全套滅菌PPE（隔離衣、口罩、頭套、鞋套、手套等），操作前使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）充分消毒手套，同時建議佩戴雙層手套，并 密封手套與袖口連接處； b) 在關閉超凈臺或生物安全柜紫外燈之前，應確保已照射滅菌20min。開啟通風，再次使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）進行內部噴霧消毒； c) 從籠架上取下籠盒，使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）噴霧籠盒外表面，并放置于超凈臺或生物安全柜中； d) 在超凈臺或生物安全柜中操作籠盒時，應確保雙手位于風幕內10cm； e) 將小鼠從臟盒轉移至新盒中時，建議使用鑷子，而且最好交替使用2把。一把在用時，另一把可浸泡于含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）中消毒，鑷子浸泡消毒的時間應 不低于3min。同一籠盒動物可使用同把鑷子，但不同籠盒需更換不同鑷子。消毒劑應保證當天新鮮配制，以防有機碎屑積累過多而導致消毒效果降低。 f) 操作完一個籠盒，應使用酒精對手套進行噴霧消毒，然后再進行下一籠盒的操作。每操作完同一個實驗項目、同一個動物品系或一面IVC籠架（最多不超過70盒），都應及時更換新手 套，以減少交叉感染的可能。 g) 垃圾處理：臟墊料、實驗廢棄物、動物尸體等應及時封袋，儲存于指定位置，無遺灑。每日垃圾應有專人負責收集，收集后該人員不得再接觸動物，并用含有效氯2000mg/L的消毒液 （或1:5:1 CLIDOX）對垃圾箱進行噴霧消毒。
Q6 對于牛棒狀桿菌感染，如何進行日常觀察及病情判斷？ 研究過程中如果用到裸鼠，除了實驗本身要求的所做觀察項目之外，研究人員還應增加一項裸鼠皮膚皮屑的觀察。如果觀察到某只裸鼠皮膚表面出 現了大量皮屑，應立即引起足夠重視：有可能是單純彌漫性皮炎，也有可能是牛棒狀桿菌感染。如果是前者，皮屑癥狀往往僅表現為個體散發，且同籠動物之間不會互相傳染，牛棒狀桿菌的 檢測呈陰性。如果某只動物出現皮屑癥狀后，同籠或鄰近籠盒的動物在后續3-5天內也全部出現相同癥狀，基本上可以判斷為牛棒狀桿菌感染
Q7 如果出現牛棒狀桿菌感染，如何進行后續操作？ (1) 患病動物處理：觀察到牛棒狀桿菌感染的現象后，建議對患病動物進行應急檢測（細菌培養或PCR）。如果的確感染了牛棒狀桿菌，一般不建議對患病動物進行治療。建議立即將同籠 動物全部淘汰，密封并進行無害化處理；籠盒（包含盒內物料）進行高壓處理后再進行臟墊料傾倒、清洗、消毒處理。若動物極其珍貴或治療處理不影響實驗研究，患病動物可以通過給予抗 生素治療減少臨床癥狀，牛棒狀桿菌對四環素、恩諾沙星和氨芐西林敏感。同時，可以使用碘液等對病變皮膚進行局部涂抹，每日1-2次，可改善皮膚病變，但已增生的角質需較長時間恢復（ 不可使用含氯或含醛成分的藥物涂抹皮膚）。由于抗生素治療僅能抑制臨床癥狀，而不能根除牛棒狀桿菌，故對于珍貴動物，需通過胚胎移植或剖腹產等手段進行凈化。 (2) 動物種群處理：如果種群內檢測到有牛棒狀桿菌陽性個體存在，建議全群淘汰。 (3) 設施凈化：受感染的動物全部淘汰后，可通過熏蒸（例如，甲醛、過氧化氫等）方式重新凈化房間。房間無菌狀況檢測合格后，方可引進牛棒狀桿菌檢驗為陰性的動物。同時在后續 管理中，建議加強生物防控措施，密切觀察動物狀況，防止該病再次感染和蔓延。
Q8 為什么我收到的裸鼠有的個體長毛？ 裸鼠并不是真正意義上的無毛，長毛是一種正常的生理現象。 裸鼠毛囊與正常有毛鼠相比，毛囊數量和功能都沒有差別，均能夠產生正常的毛根和毛桿。但對于純合子裸鼠來說，由于Foxn1基因功能缺失，毛桿中缺乏角蛋白而變得非常纖弱，絕大部 分毛桿不能正常穿透表皮，而是扭曲盤繞在膨脹的毛囊漏斗內，因此皮膚眼觀上為光裸的。 裸鼠出生后大約十天左右，在頭面部、頸部可見稀疏的毛發生長；隨著周齡增加，到5-6周，在軀干的其他部位也可見稀疏毛發的生長。 維通利華專門委托部分客戶進行了對比實驗，從腫瘤接種實驗和藥物研發單位提供的使用情況來看，這部分長有稀疏被毛的裸鼠對實驗結果沒有影響。 (Mecklenburg L, Tychsen B, Paus R. 2005, Learning from nudity: lessons from the nude phenotype. [J] Exp Dermatol.14: 797–810.) a：野生型（+/+ ）正常發育的毛桿 b：裸鼠毛桿纖弱，扭曲盤繞在膨脹的毛囊漏斗內 c：野生型（+/+ ）毛囊 d：裸鼠毛囊與野生型（+/+ ）相比，沒有明顯區別
疾病模型 SHR Q9 請問SHR（自發性高血壓大鼠）的喂養有沒有特殊要求？ 沒有特殊要求，只要飼養條件（包括飼料、墊料、飲用水、溫濕度等）符合國家相關標準即可。同時我們建議環境噪音在符合國標的前提下越低越好（國標對飼養設施內噪音的要求為不大于60分貝），SHR大鼠對噪音更為敏感些。 Q10 高血壓大鼠(SHR)血壓升高的機制是什么？ SHR大鼠是1963年京都醫學院（Kyoto school of Medicine）Okamoto利用有顯著高血壓癥狀的遠交Wistar Kyoto雄性鼠和帶有輕微高血壓癥狀的雌性鼠交配,自此開始兄妹交配并連續選擇 自發高血壓性狀。 其發生的主要機制目前還不清楚，可能是多基因共同作用的結果，目前有一些關于影響SHR血壓的文獻報道，但是尚無定論！
Q11 自行測定SHR大鼠血壓需要注意哪些問題？ (1) 動物的性別、目前所處的周齡。因為性別、周齡不同，血壓值差異較大； (2) 血壓計自身的原因： A. 廠家、型號。國產血壓計靈敏度、穩定性會相對差一些； (4) 一定要設立對照組，可以使用WKY或CD、Wistar（最好已經排除了血壓值偏高的個體），對照組收縮壓一般在90-120mmHg之間，不會過高或過低。 疾病模型 Dahl/SS Q12 Dahl/SS大鼠的對照組應選用何種品系動物？ SS-Chr 13BN染色體取代大鼠。
Q13 應用Dahl/SS大鼠進行研究時應選用何種飼料？ Dahl/SS大鼠的建議預處理：在項目實施前飼喂AIN-76A 0.3%氯鹽飼料，在將動物用于鹽相關實驗前，我們推薦使用此種飼料。實驗時，根據您的實驗要求，Charles River推薦使用4%或8%的AIN-76A進行。
Q14 Dahl/SS大鼠在飼喂低鹽飼料時，是否能保持正常的血壓值？ 可以。飼喂低鹽飼料時，Dahl/SS大鼠血壓正常（例如，<140mmHg心臟收縮壓）。
Q15 Dahl/SS大鼠與SS-Chr 13BN染色體取代大鼠之間的區別有多大？ 它們之間98%完全一致，只是包括腎素基因在內的13號染色體上的基因不同。
Q16 飼喂Dahl/SS大鼠的飼料是否會影響其高血壓的發展？ 會的，飼料中蛋白質、碳水化合物和脂肪的來源對此動物模型的高血壓和腎病發展有著極其深遠的影響。
Q17 Dahl/SS大鼠模型的高血壓是哪種類型？ Dahl/SS大鼠為低腎素鹽敏感性高血壓，與腎功能衰退相關。
疾病模型 ZDF Q18 ZDF是型Ⅰ糖尿病還是Ⅱ型糖尿��？ ZDF是Ⅱ型糖尿病，同時伴有高血脂癥（高甘油三酯血癥）、葡萄糖不耐癥（高葡萄糖血癥）、肥胖癥、高胰島素血癥。
Q19 ZDF基因型有哪幾種，如何區分？ ZDF大鼠包含4類，如下表。4周齡離乳，5周齡根據體重能明顯區分胖型和瘦型動物。
Q20 ZDF胖型大鼠推薦銷售周齡？何時開始飼喂Purina5008飼養周齡較適宜，需要誘導飼養幾周血糖值會顯著升高？ ZDF推薦銷售的周齡為7周齡。 客戶接到大鼠，適應性飼養1周后，推薦從8周齡開始使用Purina5008飼料進行誘導，誘導3周可以觀察到血糖明顯上升，誘導4周后血糖值顯著升高。
Q21 ZDF胖型大鼠經飼喂Purina5008四周后血糖值能達到多少，隨機血糖能達到多少？ Purina5008飼料誘導4周后，隨機血糖平均值19.5mmol/L，標準差2.2mmol/L。95%的個體（平均值±2SD）隨機血糖值在15.1-23.9mmol/L。
Q22 ZDF胖型大鼠飼料每天消耗情況是怎么樣？ 隨著糖尿病癥狀逐漸加重，每天飼料消耗也會逐漸上升。誘導前期（誘導1-2周階段），每天每只大鼠消耗25-30g；誘導后期（3-4周階段），每天消耗35-40g；后續繼續誘導，每天消耗大 約40g。 |
